Zawartość
HPLC oferuje szybką, zautomatyzowaną i bardzo dokładną metodę identyfikacji niektórych składników chemicznych w próbce, ale może być kosztowna, złożona i nie działa dla wszystkich próbek. Laboratoria medyczne, kryminalistyczne, środowiskowe i produkcyjne stosują tę technikę do ilościowego oznaczania i rozdzielania substancji chemicznych w próbce. HPLC ma zarówno zalety, jak i wady w porównaniu z innymi technikami.
HPLC i podobne techniki
Podobnie jak inne formy chromatografii, HPLC pozwala na oddzielenie składników chemicznych poprzez zastosowanie fazy ruchomej i fazy stacjonarnej. Faza ruchoma jest ciekła, a faza stacjonarna jest stała. Ponieważ różne komponenty poruszają się z różnymi prędkościami, oddzielają się od siebie. Alternatywne techniki obejmują elektroforezę kapilarną, w której substancje migrują przez roztwory w polu elektrycznym, oraz inne metody chromatograficzne, takie jak ekstrakcja w fazie stałej, chromatografia gazowa i chromatografia cienkowarstwowa.
Szybkość, wydajność i dokładność
W porównaniu z innymi technikami chromatograficznymi, takimi jak TLC, HPLC jest niezwykle szybka i wydajna. Wykorzystuje pompę, a nie grawitację, aby przepchnąć ciekły rozpuszczalnik przez stały materiał adsorbujący, z różnymi składnikami chemicznymi oddzielającymi się podczas ruchu z różnymi prędkościami. Proces można ukończyć w około 10 do 30 minut i zapewnia on wysoką rozdzielczość. Jest dokładny i wysoce powtarzalny. Ponieważ jest w dużej mierze zautomatyzowany, podstawowe przebiegi HPLC można wykonywać przy minimalnym szkoleniu.
Koszt i złożoność
Pomimo swoich zalet HPLC może być kosztowny, wymagając dużych ilości drogich związków organicznych. Techniki takie jak ekstrakcja do fazy stałej i elektroforeza kapilarna mogą być tańsze, a nawet szybsze, szczególnie w przypadku analizy przeprowadzonej zgodnie z dobrą praktyką produkcyjną. Chociaż stosowanie istniejących metod HPLC jest stosunkowo łatwe, rozwiązywanie problemów lub opracowywanie nowych metod może być skomplikowane. Wynika to głównie z szeregu różnych modułów, kolumn i faz mobilnych.
Czułość i rozdzielczość
Ogólnie HPLC jest wszechstronny i niezwykle precyzyjny, jeśli chodzi o identyfikację i kwantyfikację składników chemicznych. Przy wielu etapach precyzja HPLC jest w dużej mierze zależna od automatyzacji procesu i dlatego jest wysoce powtarzalna. HPLC ma niską czułość na niektóre związki, a niektórych nie można wykryć, ponieważ są nieodwracalnie zaadsorbowane. Substancje lotne lepiej rozdziela się metodą chromatografii gazowej.