Zawartość
Biochemia bada cząsteczki, takie jak DNA, RNA i białka. Techniki blottingowe są tym, czego naukowcy używają do oddzielania tego rodzaju cząsteczek. W komórkach istnieją jako mieszanina. Blotting pozwala badaczom znaleźć jedno białko spośród wielu, jak igła w stogu siana. Blotowanie zazwyczaj wykonuje się przez przepuszczenie mieszaniny DNA, RNA lub białka przez płytkę żelu. Ten żel pozwala małym cząsteczkom poruszać się szybciej niż większe. Oddzielone cząsteczki są następnie dociskane do membrany, co pomaga przenieść molekuły z żelu na membranę. Cząsteczki przyklejają się do błony, ale pozostają w tym samym miejscu, niezależnie od siebie, tak jakby nadal znajdowały się w żelu.
Western Blot
Western blotting jest powszechną techniką oddzielania białek według wielkości, ale w prostych kolumnach. Te równoległe kolumny pozwalają badaczom porównać ilość białka w różnych próbkach, które są prowadzone obok siebie, np. Tory do gry w kręgle. Na przykład, jeśli testujesz wpływ różnych ilości leku na wzrost komórek, leczysz cztery różne grupy komórek inną ilością leku. Następnie możesz rozerwać komórki i uruchomić białka każdej grupy osobnymi ścieżkami na żelu. Rozłożenie białek w ten sposób pozwala zobaczyć, jak rosnące stężenie leków wpływa na określone białko.
Northern Blot
Do wykrycia RNA stosuje się Northern blotting. Komórki można rozbić, aby uwolnić ich RNA. RNA z różnych typów komórek można uruchomić na osobnych ścieżkach na żelu. Żel rozprzestrzenia różne RNA według wielkości. Te zgrabne, równoległe rzędy RNA pozwalają badaczowi na porównanie, który typ komórki ma ile RNA. Ta metoda pozwala badaczowi ustalić, czy komórki z określonej choroby mają więcej tego RNA, czy mniej tego RNA. Northern blotting może ujawnić, w jaki sposób choroba działa na poziomie produkcji RNA.
Southern Blot
Southern blotting to oryginalna technika, która zapoczątkowała system nazewnictwa. Został wynaleziony przez Edwina Southern. Metoda Southern blot służy do wykrywania ilości DNA w mieszaninie. Podobnie jak w przypadku białka i RNA, DNA komórki można uwolnić, gdy komórka zostanie otwarta. Southern blot oddziela DNA od różnych typów komórek według wielkości. DNA z każdej próbki jest rozkładany na czyste, równoległe linie. Poszczególne fragmenty DNA można wykryć za pomocą sondy radioaktywnej lub fluorescencyjnej, która jest zaprojektowana tak, aby wiązać się tylko z tym fragmentem DNA. Sygnał energii z sondy radioaktywnej lub rozbłyski światła z sygnału fluorescencyjnego mówią badaczom, ile tego fragmentu DNA znajduje się w każdej próbce.
Inne plamy
Trzy główne techniki blotowania - zachodnia, północna i południowa - zostały zmodyfikowane na różne sposoby w celu wykrycia nieco różnych cząsteczek. Na przykład Western blot vs. Southern blot. wykrywa odpowiednio białko i DNA. Każda zmodyfikowana technika jest zwykle wykonywana w zwykły sposób, ale wykorzystuje inną metodę wykrywania cząsteczki, która jest rozkładana na równoległe linie. Bloty południowo-zachodnie wykrywają cząsteczki białka przyczepione do DNA. Bloty północno-zachodnie wykrywają cząsteczki białka przyczepione do RNA. Farwestern blots wykrywają cząsteczki białka przyczepione do innych białek.