Zawartość
Płynny bulion odżywczy jest wykorzystywany do hodowli bakterii, takich jak Escherichia coli. Przepisy na ten bulion różnią się w zależności od gatunku bakterii i obecności modyfikacji genetycznych, np. Oporności na antybiotyki. Bulion można zestalić przez dodanie agaru, który umożliwia bakteriom tworzenie odrębnych kolonii, podczas gdy w hodowli płynnej po prostu rozpraszają się w całej objętości. Jest to podstawowa, ale niezbędna technika zaawansowanych metod, takich jak klonowanie genów lub testy mikrobiologiczne. W tym artykule zakłada się, że standardowe laboratoryjne szczepy Escherichia coli należy hodować na płytkach agarowych Luria (LB) (lub na płytkach Petriego).
Odważyć 10 gramów tryptonu klasy bakteryjnej, 5 gramów ekstraktu drożdżowego, 5 gramów chlorku sodu, 15 gramów agaru lub agarozy i 1 mililitr 1N wodorotlenku sodu. Wymieszaj je z ilością destylowanej i sterylizowanej w autoklawie sterylnej wody, aż do uzyskania 1 litra pożywki. Autoklawuj media w luźno zamkniętych butelkach lub kolbach przez 25 minut. Pozostawić do ostygnięcia do około 50 stopni Celsjusza przed dodaniem odczynników, które zostaną zniszczone w wysokiej temperaturze, takich jak antybiotyki lub inne suplementy diety.
Pozostaw autoklawowane media do ostygnięcia do 50 stopni Celsjusza i nie mniej niż 45 stopni Celsjusza, ponieważ agar ustawi się w pojemniku, zanim będzie można go wlać. Uzyskaj sterylne płytki Petriego i wlej tyle, aby pokryć całą powierzchnię płytki i co najmniej połowę jej głębokości. Unikaj przepełnienia płytek i najlepiej nie pozwól, aby agar zetknął się z górną krawędzią naczynia. Pozostaw płytki do zestalenia się w sterylnym otoczeniu (np. Pod okapem z przepływem laminarnym), pozostawiając pokrywki z dala od rogu okapu.
Wysuszyć talerze. Chociaż płytki można użyć zaraz po ich zestaleniu, pewna ilość wilgoci będzie obecna na powierzchni agaru, co zapobiegnie wystarczającemu przyleganiu kolonii bakteryjnych. Dlatego najlepiej wysuszyć płytki przed nałożeniem jakichkolwiek bakterii, na przykład pozostawiając je do odstania w temperaturze pokojowej na kilka dni lub na pół godziny pod wyciągiem z przepływem laminarnym lub w inkubatorze o temperaturze 37 stopni Celsjusza.
Przechowuj talerze. Wysuszone talerze należy ułożyć na pokrywkach do góry nogami (odwrócone) i włożyć z powrotem do oryginalnego opakowania, zamknąć taśmą i owinąć folią w celu ochrony przed światłem lub w odpowiednim pojemniku. Zawsze zapisuj datę przygotowania na płytkach i unikaj używania, jeśli płytki mają więcej niż 2 miesiące.