Zawartość
Spektrofotometr służy do określania stężenia niektórych związków, takich jak białko, w roztworze. Zasadniczo światło przechodzi przez kuwetę wypełnioną próbką. Mierzona jest ilość światła pochłonięta przez próbkę. Ponieważ związki pochłaniają światło w różnych zakresach widmowych, należy ustawić odpowiednią długość fali do analizy. Istnieje wiele sposobów obliczania stężenia nieznanych próbek za pomocą spektrofotometrii, jednak zastosowanie wzorców odniesienia daje najlepszą dokładność. Ponadto standardy wskazują również, czy spektrofotometr działa nieprawidłowo, czy występują inne problemy z analizą.
Obliczanie za pomocą równań linii prostej
Przeanalizuj standardy odniesienia na początku analizy. Normy są znanymi stężeniami i służą do kalibracji sprzętu i sprawdzenia dokładności. Wszystkie próbki powinny mieścić się w zakresie roboczym norm. Jeśli nie, próbki będą musiały zostać rozcieńczone lub zwiększy się stężenie standardów.
Zrób wykres rozproszenia lub wykres liniowy ze standardowymi odczytami stężenia i absorbancji. Stężenie będzie na osi y, absorbancja na osi x. Na przykład standardy wynoszą 1 ppm, 2,5 ppm i 5 ppm. Podana chłonność wynosiła 1 ppm = 0,25, 2,5 ppm = 0,5 i 5 ppm = 0,75.
Sformatuj linię trendu, aby wyświetlić równanie na wykresie. Równanie pokaże wzór y = mx + b. Na przykład, stosując standardy z kroku 2, równanie to y = .1224x + 0,1531. Większość linii trendu jest przechwytywana na zero, ale zależy to od metody analitycznej i wartości R-kwadrat.
Przeanalizuj nieznane próbki i zapisz odczyty absorbancji.
Użyj równania (y = mx + b), aby określić stężenie próbek.
Zrozumienie równania prostej
Niech „Y” równa się stężeniu. Po to zostanie rozwiązany.
Niech „X” równa się chłonności próbki. Jest to absorbancja mierzona za pomocą spektrofotometru.
Poczekaj, aż „” wyrówna nachylenie, a „b” wyrównaj punkt przecięcia y. Oba są podane, jednak jeśli linia trendu została wymuszona przez 0, to „b” będzie wynosić 0.
Rozwiąż dla koncentracji. Korzystając z przykładu z kroku 3, zastąp „x” jako daną chłonność wynoszącą 0,563. W związku z tym:
y = 0,1224 (.563) + 0,1531
y (stężenie) = 0,222011