Zawartość
Escherichia coli, E. coli, jest bakterią, która rośnie w jelitach dolnych ssaków. Bakterie te odkryto po raz pierwszy pod koniec 1800 roku. Od tego czasu ma długą historię zastosowania w badaniach naukowych. Jest to najczęściej stosowany organizm w genetyce molekularnej. Jednym z powodów, dla których E. coli jest powszechnie stosowane w badaniach naukowych, jest to, że łatwo jest rosnąć w laboratorium. Czynniki, które sprawiają, że E. coli są łatwe w hodowli, to proste potrzeby żywieniowe, szybkie tempo wzrostu i umiarkowane wymagania w zakresie utrzymania.
Sterylizuj pętlę inokulacyjną, umieszczając ją w płomieniu palnika Bunsena. Przeciągnij dolną połowę pętli przez płomień, aż zacznie świecić na czerwono.
Poczekaj, aż pętla ostygnie. Możesz dotknąć go sterylnym agarem na talerzu, aby upewnić się, że ostygnie. Nie umieszczaj pętli na stole ani nie stykaj się z niczym innym niż sterylnym agarem lub pożądaną kulturą po sterylizacji.
Zanurz pętlę w hodowli E. coli, a następnie usuń ją.
Otwórz płytkę agarową i delikatnie przesuń pętlę tam i z powrotem po powierzchni jednej sekcji agaru. Uważaj, aby nie zarysować agaru za pomocą pętli. Agar dostarcza składników odżywczych niezbędnych do wzrostu E. coli.
Ponownie włóż pętlę do płomienia palnika Bunsena, aby go wysterylizować. Gdy pręt pętelkowy ostygnie, dotknij go do sterylnej części płytki, aby upewnić się, że jest fajny, a następnie przesuń pętlę przez pierwszą smugę, aby zrobić drugą smugę. Ta druga seria jest rozcieńczoną wersją pierwszej serii. Powtarzaj ten proces sterylizacji i przesuwania, dopóki nie przesunie się kilka odcinków płytki agarowej. Powodem tego jest, abyś mógł później wybrać z pojedynczych, klonalnych kolonii. Pomoże to upewnić się, że masz co najmniej jedną sekcję, która ma poszczególne kolonie - niezbyt skoncentrowaną (która będzie miała zbyt duży wzrost i nie pozwoli ci wybrać z jednej kolonii) i nie będzie zbyt rozcieńczona (co nie dałoby kolonii) .
Sterylizuj pętlę w płomieniu po raz ostatni, zanim odłożysz ją na miejsce pracy.
Umieść blat z powrotem na płytce agarowej. Odwróć płytkę do góry nogami i umieść ją w inkubatorze ustawionym na 37 stopni Celsjusza (98,6 stopni Fahrenheita). Ta idealna temperatura inkubacji symuluje temperaturę ludzkiego ciała, w którym przebywa E. coli. W ciągu 24 do 48 godzin na płytce agarowej pojawią się widoczne kolonie bakterii E. coli.