Enzym to białko, które katalizuje (zwiększa szybkość) reakcji chemicznych. Optymalna temperatura większości enzymów lub temperatura, w której enzymy najlepiej ułatwiają reakcje, wynosi od 35 do 40 stopni Celsjusza. Rosnąca temperatura w tym oknie zwiększa szybkość reakcji, ponieważ pobudza cząsteczki i zwiększa szybkość, z jaką enzymy / reagenty zderzają się i reagują z wytworzeniem produktu. Jednak zbyt duże zwiększenie temperatury może zdenaturować enzym i całkowicie uniemożliwić jego działanie.
Określić optymalną temperaturę enzymu, ogrzewając reakcję w nieskończenie małych ilościach i pobierając małe próbki reakcji, aby ustalić, kiedy wystąpi maksymalna szybkość wytwarzania produktu.
Wybierz metodę Określ sposób pomiaru stężenia produktu w różnych punktach eksperymentu. Na przykład można zmierzyć stężenie wielu produktów za pomocą spektrofotometru i obliczyć stężenie na podstawie absorbancji lub przez pomiar fluorescencji i obliczenie stężenia na podstawie fluorescencji.
Skonfiguruj eksperyment. Umieść reagenty i enzym w małym pojemniku z pokrywką, takim jak fiolka scyntylacyjna. Rozpocznie się reakcja. Umieścić fiolkę scyntylacyjną w większej zlewce z wodą o temperaturze pokojowej. Umieść zlewkę na płycie grzewczej. Umieść termometr w zlewce. Pozwala to zmierzyć temperaturę reakcji w różnych punktach.
Pobierz 100 mikrolitrową próbkę reakcji w temperaturze pokojowej, około 25 stopni Celsjusza. Włącz płytę grzewczą. W różnych temperaturach od 30 do 40 stopni Celsjusza (30,5, 31, 31,5 itd.) Pobierz 100 mikrolitrów próbek swojej reakcji.
Określ stężenie produktu w każdej temperaturze. Gdy temperatura wzrośnie powyżej 40 stopni Celsjusza, zobaczysz spadek szybkości przekształcania substratu w produkt, ponieważ enzym ulega denaturacji. Punktem, w którym produkt jest wytwarzany z maksymalną szybkością, jest punkt, w którym temperatura jest optymalna.