Zawartość
Izolowanie bakterii z gleby jest ważnym pierwszym krokiem w wielu eksperymentach mikrobiologicznych. Po wyizolowaniu bakterie można poddać dalszej analizie w celu określenia takich rzeczy, jak ich gatunek i ich funkcja w środowisku glebowym. Nawet niewielka ilość gleby może zawierać miliony bakterii, co powoduje konieczność rozcieńczenia próbki gleby przed wyizolowaniem bakterii z próbki.
Odmierz 100 ml. destylowaną wodę w cylindrze miarowym i dodaj do jałowej butelki.
Odważyć 1 g próbki gleby i dodać do butelki wody destylowanej.Szczelnie zamknij butelkę i wstrząśnij, aby dokładnie wymieszać roztwór.
Oznacz sterylne probówki „10 ^ -3”, „10 ^ -4”, „10 ^ -5” i „10 ^ -6”. Dodaj 9 ml wody destylowanej do każdej probówki, używając jednej z pipet.
Przenieść 1 ml roztworu z butelki do probówki oznaczonej „10 ^ -3”, używając nowej pipety. Zakręć rurkę i delikatnie wiruj, aż roztwór dobrze się wymiesza.
Przenieść 1 ml roztworu z probówki „10 ^ -3” do probówki „10 ^ -4” za pomocą nowej pipety. Zakryj rurkę „10 ^ -4” i wiruj, aby wymieszać. Powtórz tę metodę, aby przenieść roztwór z probówki „10 ^ -4” do probówki „10 ^ -5”, a następnie z probówki „10 ^ -5” do probówki „10 ^ -6”.
Płytka trzy próbki każda z probówek „10 ^ -4”, „10 ^ -5” i „10 ^ -6”. Użyj nowej pipety, aby przenieść 1 ml roztworu z probówki na płytkę Petriego. Dodaj do płytki około 15 ml agaru odżywczego; następnie nałóż pokrywkę na talerz i delikatnie wiruj, aby agar zakrywał spód płytki.
Zrób płytkę kontrolną, wkładając 1 ml wody destylowanej do płytki Petriego, używając nowej pipety. Dodaj agar; załóż pokrywkę i obróć talerz.
Pozostaw płytki Petriego pionowo, aż agar się zestali. Następnie odwróć płytki i inkubuj je - w inkubatorze lub w temperaturze pokojowej - przez zaledwie 24 godziny i do pięciu dni.
Wyjmij płytki z inkubatora po pożądanym czasie inkubacji. Policz kolonie bakteryjne na płytkach zawierających około 30 do 300 kolonii. Użyj stałego markera, aby zaznaczyć kolonie, które już policzyłeś, aby uniknąć podwójnego liczenia tych samych kolonii.
Podziel liczbę kolonii liczoną przez rozcieńczenie - „10 ^ -4”, „10 ^ -5” lub „10 ^ -6” - roztworu glebowego dla każdej płytki. Znajdź liczbę bakterii hodowlanych w pierwotnym gramie gleby, uśredniając wyniki z każdej policzonej płytki.