Zawartość
Naukowcy używają seryjnych rozcieńczeń (seria rozcieńczeń 1:10) do obliczenia gęstości populacji kultur bakteryjnych. Gdy kropla kultury zawierającej niewielką liczbę bakterii zostanie wysiana i inkubowana, każda komórka teoretycznie będzie wystarczająco daleko od innych komórek, aby utworzyć własną kolonię. (W rzeczywistości niektóre kolonie mogą być potomkami dwóch pobliskich komórek, ale zdarza się to rzadko w rozcieńczonych hodowlach, a zatem liczba kolonii jest bardzo dobrym oszacowaniem liczby komórek pierwotnie przeniesionych na płytkę.) Ponieważ gęstość populacji jest nieznane, należy użyć różnych rozcieńczeń, aby otrzymać jedną płytkę z odpowiednią liczbą kolonii.
Szeregowe rozcieńczenia
Oznacz sześć probówek (każda zawierająca 9 ml pożywki wzrostowej) jako 1 do 6. Oznacz sześć płytek agarowych jako 1 do 6. Użyj pipety i jałowych końcówek pipety o pojemności 1 mililitrów (ml), aby przenieść 1 ml kultury bakteryjnej do probówki 1.
Dobrze wymieszaj i przenieś 1 ml z probówki 1 do probówki 2 za pomocą pipety i sterylnych końcówek 1 ml.
Powtórz krok 2 dla pozostałych probówek, za każdym razem przenosząc 1 ml z ostatnio używanej probówki do następnej probówki.
Za pomocą pipety i sterylnych końcówek 0,1 ml przenieś 0,1 ml z probówki 1 na płytkę agarową. Podpal szklany pręt w kształcie litery L i użyj go, aby równomiernie rozprowadzić kroplę wokół płyty. Inkubuj płytkę przez 48 godzin w temperaturze odpowiedniej dla używanych bakterii. Różne rodzaje bakterii mają różne optymalne temperatury wzrostu. Jeśli nie możesz znaleźć optymalnej temperatury wzrostu za pomocą materiału odniesienia, spróbuj inkubować płytki w 25 i 37 stopniach.
Powtórz krok 4, za każdym razem przenosząc płyn z innej probówki na odpowiednią płytkę.
Obliczenia ludnościowe
Obserwuj sześć płytek i wybierz tę z 30 do 200 izolowanymi koloniami.
Pomnóż liczbę kolonii na płytce przez 10, aby obliczyć liczbę komórek na ml kultury z użytej probówki do rozcieńczania.
Pomnóż liczbę z kroku 2 przez 10 ^ (numer płytki), aby obliczyć liczbę komórek na ml oryginalnej hodowli. Wartość 10 ^ (liczba płytek) jest współczynnikiem rozcieńczenia kultury użytej do zaszczepienia tej płytki.